Su carrera profesional comienza en el Diario Pueblo, donde trabajó entre 1970 y 1983 como periodista especializada en crónica parlamentaria.
Más tarde pasaría al Diario Ya y a las revistas Interviú y Panorama. En radio se incorpora a Antena 3 Radio.
A partir de 1989 empieza a interesarse por los asuntos de la llamada prensa rosa, incorporándose a la redacción de la revista Diez minutos. Cuatro años después da el salto a televisión de la mano de María Teresa Campos, al convertirse en una de las colaboradoras habituales de su programa Pasa la vida en Televisión española, compartiendo sección con la también periodista Carmen Rigalt.
En 1990 el Diario Ya publicó en portada un artículo de Rosa Villacastín en el que se aseguraba que "el sida pone a Amparo Muñoz al borde de la muerte" y, dos días más tarde, se daba por hecho que se encontraba en "fase terminal", lo que la actriz desmintió con análisis médicos en el programa de Julián Lago La máquina de la verdad.
En 1996, como casi todo el equipo del programa, Rosa Villacastín continua con María Teresa en Día a día, su nuevo programa en Telecinco. Un año más tarde, en la temporada 1997-1998, ficha por Antena 3, que le confía un nuevo programa, en el que comparte presentación con Ana Rosa Quintana: Extra Rosa, un espacio sobre crónica social.
En 1999 la cadena le ofrece hacerse cargo del magazine matinal Las mañanas de Rosa (1999). El espacio no pudo con la comepetencia que desde Telecinco le hacía María Teresa Campos y fue retirado tan sólo dos meses después de su estreno. Inmediatamente se integra como colaboradora y comentarista en el programa de Ana Rosa Sabor a ti (1999-2004).
Tras conducir el programa de debate Grandiosas (2001), en Telecinco junto a Lolita Flores y Belinda Washington, que no logró el respaldo de la audiencia, regresa a Antena 3 donde ha continuado colaborando en diferentes programas, y ha presentado junto a Olga Marset el magazine La vida es rosa (2005) en la franja de tarde.
En la temporada 2006-2007 trabaja en el programa Las mañanas de Cuatro, junto a Concha García Campoy y desde septiembre de 2007 lo hace en el magazine de Antena 3 A 3 bandas. En 2012-2013 además pasó a La 1 de TVE, con el programa +Gente.
Fue además colaboradora habitual de la Cadena SER entre 1998 y 2008 e intervino en el programa La Ventana. Desde septiembre de 2008 colabora en el programa Queremos hablar, de Punto Radio, presentado por Ana García Lozano.
Señalar como dato de interés que es nieta de Francisca Sánchez del Pozo, la última esposa del poeta nicaragüense Rubén Darío.
En 2013-2014 colabora en el programa de los sábados de Telecinco, Abre los ojos... y mira presentado por Emma García.
En 2015 se incorpora como tertuliana al programa Amigas y conocidas (La 1) presentado por Inés Ballester.
